Urutan genomik saka umume virus wis dikenal.Probe asam nukleat yaiku bagean cendhak DNA sing dirancang kanggo hibridisasi karo DNA virus utawa segmen RNA komplementer.Reaksi rantai polimerase (PCR) minangka teknik sing luwih efisien kanggo deteksi virus.Cara diagnostik throughput dhuwur wis dikembangake bubar.
A. Teknik hibridisasi asam nukleat
Hibridisasi asam nukleat, utamane kalebu Southern blotting (Kidul) lan Northern blotting (Northern), minangka teknik anyar sing cepet berkembang ing bidang diagnostik virus.Rasional tes hibridisasi yaiku nggunakake segmen DNA sing cendhak (disebut "probe") sing dirancang kanggo hibridisasi karo segmen DNA virus utawa RNA pelengkap.Kanthi pemanasan utawa perawatan alkalin, DNA utawa RNA target ganda-stranded dipisahake dadi untaian tunggal lan banjur diimobilisasi kanthi dhukungan sing padhet.Sawise iku, probe ditambahake lan hibridisasi karo target DNA utawa RNA.Amarga probe kasebut diwenehi label isotop utawa nuklida non-radioaktif, target DNA utawa RNA bisa dideteksi liwat autoradiografi utawa sistem biotin-avidin.Amarga umume genom virus wis dikloning lan diurutake, bisa dideteksi nggunakake urutan spesifik virus minangka probe ing spesimen.Saiki, cara hibridisasi kalebu: dot blot, hibridisasi in situ ing sel, DNA blotting(DNA) (Southern blot) lan RNA blotting(RNA) (Northern blot).
B. Teknik PCR
Ing taun-taun pungkasan, sawetara teknik amplifikasi asam nukleat in vitro wis dikembangake adhedhasar PCR, kanggo nguji virus sing ora sensitif utawa ora bisa ditanam.PCR minangka cara sing bisa sintesis urutan DNA spesifik kanthi reaksi polimerase in vitro.Proses PCR kalebu siklus termal saka telung langkah: denaturasi, annealing, lan extension Ing suhu dhuwur (93 ℃ ~ 95 ℃), DNA untaian pindho dipisahake dadi rong untaian DNA siji;banjur ing suhu kurang (37 ℃ ~ 60 ℃), loro primer nukleotida disintesis anneal menyang perangan DNA pelengkap;dene ing suhu sing cocok kanggo enzim Taq (72 ℃), sintesis rantai DNA anyar diwiwiti saka primer 3'end nggunakake DNA komplementer minangka cithakan lan nukleotida tunggal minangka bahan.Dadi sawise saben siklus, siji rantai DNA bisa digedhekake dadi rong rantai.Mbaleni proses iki, saben rantai DNA sing disintesis ing siji siklus bisa digunakake minangka cithakan ing siklus sabanjure, lan jumlah rantai DNA tikel kaping pindho ing saben siklus, sing tegese produksi PCR digedhekake kanthi kecepatan log 2n.Sawise 25 nganti 30 siklus, produksi PCR diidentifikasi liwat elektroforesis, lan produk DNA spesifik bisa diamati ing sinar UV (254nm).Kanggo kaluwihan spesifik, sensitivitas, lan penak, PCR wis diadopsi ing diagnosis klinis saka akeh infeksi virus kayata HCV, HIV, CMV, lan HPV.Amarga PCR sensitif banget, bisa ndeteksi DNA virus ing tingkat fg, operasi kasebut kudu ditindakake kanthi ati-ati supaya ora positif palsu.Kajaba iku, asil positif ing tes asam nukleat ora ateges ana virus infèksi sing urip ing sampel kasebut.
Kanthi aplikasi teknik PCR sing akeh, teknik lan metode anyar dikembangake adhedhasar teknik PCR kanggo macem-macem tujuan tes.Contone, PCR kuantitatif wektu nyata bisa ndeteksi viral load;PCR in situ digunakake kanggo ngenali infeksi virus ing jaringan utawa sel;PCR nested bisa nambah spesifisitas PCR.Antarane wong-wong mau, PCR kuantitatif wektu nyata wis dikembangake kanthi luwih cepet.Akeh teknik anyar, kayata probe hidrolisis TaqMan, probe hibridisasi, lan probe beacon molekuler, wis digabung dadi teknik PCR kuantitatif wektu nyata, sing akeh digunakake ing riset klinis.Kejabi ngenali viral load ing cairan awak pasien kanthi akurat, cara iki uga bisa digunakake kanggo ndeteksi mutant toleran obat.Mulane, PCR kuantitatif wektu nyata utamane ditrapake ing evaluasi efek kuratif lan pengawasan toleransi obat.
C. Deteksi dhuwur-throughput saka asam nukleat virus
Kanggo nyukupi kabutuhan diagnosa cepet saka penyakit infèksius anyar sing muncul, macem-macem cara deteksi throughput dhuwur, kayata chip DNA (DNA), wis ditetepake.Kanggo Kripik DNA, probe khusus disintesis lan dipasang ing chip silikon cilik kanthi kapadhetan dhuwur banget kanggo mbentuk DNA probe microarray (DNA) sing bisa hibridisasi karo sampel.Sinyal hibridisasi bisa digambar nganggo mikroskop confocal utawa pemindai laser lan luwih diproses dening komputer lan set data gedhe babagan gen sing beda bisa dipikolehi.Ana rong jinis chip DNA."Chip sintesis" kaya ing ngisor iki: oligonukleotida spesifik disintesis langsung ing kripik.Liyane yaiku chip blumbang DNA.Gen kloning utawa produk PCR dicithak kanthi tertib ing slide.Kauntungan saka teknologi chip DNA yaiku deteksi simultan saka urutan DNA sing akeh banget.Versi paling anyar saka chip deteksi patogen bisa ngenali luwih saka 1700 virus manungsa bebarengan.Teknologi chip DNA ngrampungake masalah metode hibridisasi asam nukleat tradisional lan nduweni aplikasi sing wiyar banget ing diagnosis virus lan studi epidemiologis.
Wektu kirim: Dec-23-2020